免疫专题血清GFAP检测对早期脑出血

作者：医院

李立和，张超，傅金瑞，刘宝阳，齐金龙

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摘要

目的探讨血清中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）对早期脑出血的诊断价值。方法选取我院神经内科持续神经功能缺损(NIH卒中评分≥4)症状发作后4h内的脑卒中住院患者，入院时抽取血样，采用电化学发光免疫测定法测定血清GFAP浓度，经CT或MRI确诊后分为脑出血组和脑缺血组，比较脑出血组与脑缺血组患者血清中GFAP的水平。结果例患者(脑出血82例，缺血性脑卒中例，疑似卒中35例)中，脑出血患者GFAP浓度明显高于缺血性脑卒中患者[中位数(四分位范围)0.26μg/L(0.16-3.16)和0.01μg/L(0.01-0.01)，p0.]，GFAP临界值为0.03μg/L时，灵敏度为84.15%，特异性为96.15%，区分脑出血与缺血性脑卒中和疑似卒中ROC分析曲线下面积为0.(95%CI，0.-0.)，p0.。结论血清GFAP被认为是早期中风症状病人预测颅内出血的生物学标记物。

研究表明，脑出血（Intracerebralhemorrhage,ICH）患者占脑卒中患者的8%-15%，亚洲地区的发病率为20%-30%[1-2]。ICH预后一般较差，如为及时诊治，常于1年内死亡或者发生神经功能缺陷[3]。因此，快速准确的对患者病情进行诊断，有助于治疗措施的制定，进一步提高治疗效果。目前多用脑显像技术区分ICH和缺血性脑卒中（Ischemicstroke,is），但需要将患者带到配备有计算机断层摄影(CT)的医院，增加了确诊及救治时间[4-5]。有报道称血清胶质纤维酸性蛋白（Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）对鉴别早期ICH和IS有较高的诊断价值，值得临床推广应用[6]。

1对象与方法

1.1研究对象

年1月至年11月，选取了天津医科大学宝坻临床学院神经内科疑似脑卒中患者例。纳入标准:①诊断标准参照《中国急性缺血性脑卒中诊治指南》，并通过头部CT、MRI等检查得以确诊；②首次发病；排除标准：①合并头部肿瘤、或其余恶性肿瘤脑转移者；②合并脑外伤；③合并全身系统感染、自身免疫性疾病、肝肾功能障碍等者；④近期进行过抗血栓、抗凝等治疗。并选择同期我院接诊的例健康体检者作为健康人群。入院后采血3mL及时检测，或分离血清-80℃保存待测。

1.2仪器与试剂

罗氏cobase电化学发光分析仪，罗氏胶质纤维酸性蛋白电化学发光法试剂盒由罗氏诊断产品（上海）有限公司提供。

试剂批号：；胶质纤维酸性蛋白质控品由罗氏诊断产品（上海）有限公司提供,批号。

1.3方法

对健康人群(n=份血清样品)和医院神经内科疑似脑卒中患者例早期患者，用罗氏e电化学发光分析仪分别进行GFAP浓度检测，按照影像学诊断进行疾病分组，并进行统计学分析。

1.4统计学方法

使用SPSS16.0进行统计分析，采用独立样本t检验和Wilcoxon秩和检验分析连续变量，采用Mantel-Haenszel卡方检验和Fisher’s精确检验分析分类变量。通过ROC曲线分析，计算出区分ICH与IS和卒中模拟的最佳血清GFAP临界浓度，敏感性和特异性指标以及阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)由交叉表得出。

2结果

2.1疑似脑卒中患者例，从症状开始到入院的平均时间为分钟，平均年龄66.7岁（41-89岁），52.3%为男性，82例ICH，例IS，35例为疑似卒中，在测定GFAP质控品在控制范围的条件下，血清中GFAP浓度结果分析如表1。健康人群(n=份血清样品)在95%显示GFAP值低于0.03μg/L，见表2。

表1例研究对象的基本情况

IS组

ICH组

疑似卒中

合计

研究

例数(%)

（65.8）

82（24.0）

35（10.2）

（.0）

平均年龄,岁(SD)

67.3（12.7）

64.4（12.1）

68.1（11.8）

66.7（12.5）

性别,男性

例数(%)

（50.7）

43（52.4）

22（62.9）

（52.3）

NIH评分中位数,(IQR)

9（5-16）

11（7-18）

8（6-12）

9（5-18）

偏瘫,

例数(%)

（79.1）

67（81.7）

20（57.1）

（77.5）

皮质征,

例数(%)

（67.1）

48（58.5）

16（45.7）

（62.9）

高血压,

例数(%)

（83.6）

64（78.0）

30（85.7）

（82.5）

糖尿病,

例数(%)

46（20.4）

22（26.8）

8（22.9）

76（22.2）

胆固醇

增高,

例数(%)

75（33.3）

17（20.7）

11（31.4）

（30.1）

VKA治疗,

例数(%)

29（12.9）

11（13.4）

10（28.6）

50（14.6）

抗血小板治疗,

例数(%)

90（40.0）

17（20.7）

16（45.7）

（36.0）

从症状开始到入院的平均时间，分钟（SD）

（53）

（92）

（63）

（65）

经统计分析：脑出血患者血清GFAP浓度明显高于IS或疑似卒中[中值(四分位范围)0.26μg/L(0.16-3.16)和0.01μg/L(0.01-0.01)，p0.]。

表2例健康人群血清中GFAP浓度统计结果

性别

例数（%）

平均年龄，岁（SD）

95%位GFAP浓度，μg/L

男

（52.2）

66.0（12.6）

0.01

女

98（47.8）

61.1（13.1）

0.01

合计

（）

63.6（13.3）

0.01

2.2ROC曲线分析ROC分析(图1)显示曲线下面积(AUC)0.(95%CI0.–0.)下，GFAP浓度为0.μg/L是区分ICH与IS和中风的最佳临界点，p0.]。在此截点，ICH的检测灵敏度为84.15%，特异性为97.69%，总准确率为94.44%(PPV:92.00%，NPV:95.13%)。然后我们试图通过将截止值降低到0.μg/L来优化NPV，这导致NPV的准确率到93.27%。但特异性降至96.15%，PPV降至87.34%。

图1.描述血清GFAP对ICH患者和IS患者(包括疑似卒中)鉴别诊断准确性的ROC曲线分析。

AUC:0.，配置项:0.–0.，*p0.。由曲线计算出的最佳截断值为GFAP=0.μg/L当截断值为GFAP=0.μg/L时，鉴别诊断ICH的灵敏度为84.15%，特异度为96.15。

3讨论

胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)是星形胶质细胞中直径8～10μm的中间丝，位于核周和细胞质中，是构成胶质细胞的重要骨架成分，可作为星形胶质细胞的特异性标志物[7]。张丽勇[8]等研究表明GFAP从大鼠脑干损伤后30min开始增加，损伤后48h达到峰值并开始下降，但损伤后72h仍高于对照组。

在本研究中，从表1和图1可以看出例早期脑卒中患者中，ICH患者GFAP浓度明显高于IS患者[中位数(四分位范围)0.26μg/L(0.16-3.16)和0.01μg/L(0.01-0.01)，p0.]。GFAP临界值为0.03μg/L时，灵敏度为84.15%，特异性为96.15%，区分ICH与IS和疑似卒中ROC分析曲线下面积为0.(95%CI，0.-0.)，p0.。这说明在早期ICH中，血清中GFAP灵敏度和特异性均较高，可以被认为是鉴别早期脑卒中患者的重要诊断血清标志物。文献报道[6]中，脑梗死患者发病后血清GFAP含量增高与本研究血清中GFAP对早期脑出血与脑缺血的鉴别研究结果并不矛盾，脑卒中患者在不同时间内血清中GFAP呈现不同浓度值变化。

在急性ICH中，由扩张的血肿引起的星形胶质细胞破坏被认为是GFAP快速释放到血液中的原因[9]，GFAP是一种不被细胞主动分泌的结构蛋白[10]，除中风和脑外伤外，胶质母细胞瘤是唯一与血清中GFAP浓度增加有关的疾病[11]，在早期IS中，GFAP在血管闭塞前6-12小时并未释放，GFAP被延迟释放，在血管闭塞6-12h之前也不会发生细胞完整性的丧失[12]，脑出血后，导致血肿周围水肿体积增大，脑组织缺血缺氧越严重，大量星形胶质细胞增生活跃，GFAP合成增加，细胞膜完整性被破坏，GFAP外溢，导致血清GFAP含量增高[6]。因此，在IS中血清GFAP含量不增高；在早期ICH中，GFAP从脑细胞迅速释放到血流中，因此，GFAP被发现能够正确地识别大约80%的ICH患者，而早期IS患者的GFAP值在大约97%的病例中低于临界水平。

综上所述，血清中GFAP可作为早期中风症状病人预测颅内出血的生物学标记物。

参考文献

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[12]EngLF,GhirnikarRS,LeeYL.GlialFibrillaryAcidicProtein:GFAP-thirty-oneyears(–)[J].NeurochemicalResearch,,25(9-10):-.doi：10./A:767787.

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